近日,New Phytologist 在線發表了中國農業大學何紹貞/劉慶昌甘薯研究團隊題為“A non-tandem CCCH-type zinc finger protein,IbC3H18,functions as a nuclear transcriptional activator and enhances abiotic stress tolerance in sweet potato” 的研究論文。該論文揭示了非串聯型CCCH鋅指蛋白IbC3H18通過調節活性氧、ABA、光合作用及離子交換途徑調控甘薯逆境脅迫的分子機理。
甘薯(2n=B1B1B2B2B2B2=6x=90)是重要的糧食、飼料和工業原料,其高產、穩產、富含淀粉,可以轉化為燃料乙醇而被視為重要的糧食和新型生物質能源作物。甘薯較耐旱、耐瘠薄、耐低度鹽堿,加強對甘薯耐鹽抗旱性的研究,有助于充分利用我國廣闊的干旱瘠薄的丘陵和鹽漬地,而又不與糧食爭地,對國家的糧食安全和生物質能源發展意義重大。
目前,植物中關于非串聯型CCCH鋅指蛋白的研究報道較少。該研究團隊從甘薯耐鹽材料ND98中克隆得到非串聯型CCCH鋅指蛋白編碼基因IbC3H18,并對其功能進行了探索。亞細胞定位及轉錄激活實驗結果表明,IbC3H18是一個核定位的轉錄激活因子,能夠快速響應鹽、旱、H2O2及ABA脅迫誘導。IbC3H18的啟動子上含有多個脅迫響應順式作用元件,且能夠強烈響應鹽及ABA的誘導表達。
研究團隊通過農桿菌介導法,獲得IbC3H18的過表達及RNAi沉默甘薯轉基因植株,系統的離體、水培及盆栽鑒定結果表明,過表達該基因能夠顯著增強轉基因甘薯的耐鹽、抗旱及抗氧化性,而RNAi沉默植株的抗性顯著降低。研究團隊對鹽脅迫下的過表達及RNAi沉默甘薯株系進行了RNA-seq和ChIP-seq分析。結果表明,IbC3H18能夠結合在氧清除相關基因CCS、ABA受體基因PYL8及抗逆相關基因SOS5的啟動子上激活這些基因的表達。結合RNA-seq差異基因富集結果及生理生化指標測定結果,過表達IbC3H18通過激活ROS清除系統和ABA信號途徑,增加光合活性,維持離子滲透平衡來提高甘薯的抗逆性。
此外,研究團隊通過酵母雙雜交、熒光素酶互補(LCI)、雙分子熒光互補(BiFC)及免疫共沉淀(Co-IP)技術獲得并驗證了IbC3H18的互作蛋白IbPR5。過表達IbPR5能夠通過激活ROS清除系統提高轉基因煙草的抗逆性。該研究闡明了甘薯抗逆轉錄因子IbC3H18調控甘薯逆境應答的分子機制。
中國農業大學博士后張歡為該論文的*作者,中國農大農學院何紹貞教授和劉慶昌教授為論文的共同通訊作者,生物學院李繼剛教授參與了該研究的指導工作。該研究得到了國家自然科學基金、北京市創新團隊和中國博士后科學基金的經費支持。
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